（a）用氯氮平处理的两个CKO模型胶质瘤细胞系的增殖速率如图所示 。将细胞保持在完整的培养基中 。通过EDU掺入分析测量培养细胞的增殖速率（每组n = 4个生物学独立的样品）。（B – D）在肿瘤阶段氯氮平治疗下CKO模型中肿瘤侵入性（C）和肿瘤增殖（D）的定量 。肿瘤的侵入性定义为距核心肿瘤区域（肿瘤中最高密度）到正常区域（肿瘤细胞密度的距离 ，肿瘤细胞的密度与远离肿瘤区域的密度相同） ，作为白色矩形（b）的长度 。计算每只鼠标的五个随机区域（每组n = 5只小鼠）。肿瘤小鼠来自图2d的前两列中使用的一组小鼠。（e）在氯氮平治疗下，粒细胞 ，巨噬细胞 ，树突状细胞，树突状细胞，B淋巴细胞和T淋巴细胞的百分比（在8周时）的百分比 。氯氮平注射 ，氯氮平由腹腔注射 。（每周两次注射三周）。氯氮平饮用 ，小鼠可以进入含水的氯氮平三周（每组n = 4只小鼠） 。有关FACS门控策略，请参见图2 。（F）粒细胞 ，巨噬细胞 ，树突状细胞，B淋巴细胞和T淋巴细胞在WT ，OMP-HM3DQ和OMP-HM4DI转基因小鼠（在8周下）的WT ，OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM3DQ和OMP-HM4DI年龄治疗的百分比。氯氮平的处理与（e）中的注射范例相同 。氯氮平由腹腔注射 。（每周两次注射三周）。带氯氮平，氯氮平 。这些值表示为与WT小鼠的比率（每组n = 4小鼠） 。（g）通过Evans Blue Dye评估了血脑屏障的完整性。没有Evans Blue ，没有Evans Blue治疗 。带埃文斯蓝 ， 通过埃文斯蓝色处理 。使用了8周时的WT小鼠。氯氮平治疗方案通过饮用水或i.p.注射与（e）中的注射相同。有关详细信息，请参见方法部分（每组n = 4只小鼠） 。（H）通过氯氮平治疗的WT ，OMP-HM3DQ ，OMP-HM4DI和CKO肿瘤小鼠的CD15的免疫化学染色 。脾脏被用作阳性对照。红色箭头指向脾脏中的CD15+粒细胞 。用车辆处理的WT小鼠用作阴性对照 。T，肿瘤区域。WT，OMP-HM3DQ ，OMP-HM4DI小鼠的大脑样品来自（F）中分析的小鼠 。CKO肿瘤小鼠的大脑样品来自图2D中使用的氯氮平处理的CKO小鼠 。(i) Quantification of Iba1+ cell density in CKO_Omp-hM4Di model at the pre-transforming stage as indicated in Extended Data Fig. 4j (n = 6 OBs for CKO, n = 6 OBs for CKO with clozapine drinking, n = 4 OBs for CKO_Omp-hM4Di, n = 6 OBs for CKO_Omp-hM4Di with clozapine drinking).P值：A列VS B ，0.9932;vs c，0.3648;vs d ，0.9984;B vs c ，0.4936;b vs d，0.9728;C vs d ，0.2964。(j) Quantification of Iba1+ cell density in CKO_Omp-hM3Dq model at the pre-transforming stage as indicated in Extended Data Fig. 4l (n = 6 OBs for CKO with vehicle, n = 6 OBs for CKO with clozapine, n = 4 OBs for CKO_Omp-hM3Dq with vehicle, n = 6 OBs for CKO_Omp-hM3Dq with clozapine).P值：A列VS B ，0.7722;a vs c，0.6589;A VS D ，0.8465;B vs c ，0.2175;b vs d，0.3158;C vs d ，0.9725 。（km）定量巨噬细胞/小胶质细胞的密度（由Iba1+）（k）和非肿瘤区域（K ，L）或CKO肿瘤大脑的肿瘤区域（K，M）中激活的巨噬细胞/小胶质细胞（CD68+IBA1+）（L）的密度 。非肿瘤区域被定义为不包括明显的肿瘤病变的大脑区域（通常远离肿瘤核心）。氯氮平是通过饮用水从P30到P210进行的 。在P210分析小鼠（cko的n = 6 obs，n = 4 obs cko在（k）中喝氯氮平 。（k）中的氯氮平。（l – n）中的每组n = 4 obs）。（o）（K -N）中分析的CKO模型的巨噬细胞/小胶质细胞的代表性图像 。提供了低功率和高功率图像 。低功率图像中的合并通道在内 ，包括DAPI ，TDT和IBA1通道。大功率图像中的合并通道在内，包括DAPI ，CD68 ，TDT和IBA1通道 。n，非肿瘤区域 。T ，肿瘤区域。值得注意的是 ，在（K – O）中分析的样品来自图2d中使用的同一组CKO小鼠（前两列） 。（p）用氯氮平施用的CKO_OMP-HM4DI小鼠肾小球中MTQ2和TDT表达的代表性图像 。（Q和R）用（q）和没有（r）氯氮平治疗的CKO_OMP-HM4DI小鼠的肾小球中MTQ2（也假定HM4DI）和TDTOMATO强度的定量。每个点代表一个肾小球 。计算了双面皮尔逊相关系数 。（S和T）在对照和左NARIS遮挡小鼠中的酪氨酸羟化酶（Th）的免疫荧光染色（S）和蛋白质印迹（T）。小鼠在p31处插入，并在两个月后进行分析 。有关凝胶源数据 ，请参见图1 。（U – W）实验程序（U）的方案（U）和在预先构造阶段的单个NARIS遮挡分析。分析了突变细胞（W）的增殖细胞密度（V）和增殖速率（每组n = 4只小鼠）。（X – Z）实验程序（X）的方案 ，代表性的全脑图像（Y）和用小鼠胶质瘤细胞系接枝的L-NARIS闭塞小鼠的定量（Z） 。比例尺：（b），100μm；（O） ，500μm和50μm；（P） ，400μm;（S），1000μm 。邓内特（Dunnett）的单向方差分析（A）在（a），（e） ，（f） ，（g），（i）和（j）中进行的多重比较后测试。（c） ，（d） ，（k），（l） ，（m） ，（n），（v） ，（w） ，（w）和（z）中的单侧t检验 。NS，不显着 ，**** p <0.0001 。数据是平均±S.E.M.盒子图标记了中位 ，上和下四分位数和胡须的最小值至（v）和（w）的最大值。另请参阅方法部分，以获取实验的每个部分的详细信息 。
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